
 |
|
|
* ÇÕ¼º
ÆéŸÀ̵å´Â Ç×üÀÇ Á¦Á¶, ´Ü¹éÁúÀÇ ±â´É ¹× ±¸Á¶ ¿¬±¸, ´Ü¹éÁú ºÐÇØ È¿¼ÒÀÇ
±âÁú,
½Å¾à ¹× »ý¸® Ȱ¼º ¹°ÁúÀÇ Å½»ö µî »ý¸í°úÇÐ ¿¬±¸¿¡ ±¤¹üÀ§ÇÏ°Ô »ç¿ëÇÒ ¼ö ÀÖ½À´Ï´Ù.
ÇÕ¼º ÆéŸÀ̵å´Â
ÀçÁ¶ÇÕ ´Ü¹éÁú¿¡ ºñÇØ Á¦Á¶ ½Ã°£°ú °æºñ°¡ Àý°¨µÉ »Ó¸¸ ¾Æ´Ï¶ó,
´Ù¾çÇÑ modificationÀ» ÅëÇÏ¿© ÀçÁ¶ÇÕ ´Ü¹éÁú¿¡¼ ¾ò±â ¾î·Á¿î ÇüÅÂÀÇ ±¸Á¶µµ Á¤È®ÇϰÔ
ÇÒ ¼ö ÀÖ½À´Ï´Ù.
ÆéŸÀ̵å ÁÖ¹® Á¦ÀÛ ¼ºñ½º´Â »ç¿ëÀÚ°¡ ¿øÇÏ´Â ¾Æ¹Ì³ë»ê ¼¿ÀÇ ÆéŸÀ̵带 ÇÕ¼ºÇÏ¿©
Á¦°øÇϸç
¿¬±¸ ¸ñÀû¿¡ µû¶ó ´Ù¾çÇÑ ½ºÄÉÀÏÀÇ ¾ç°ú ¼øµµ·Î ÀÇ·ÚÇÏ½Ç ¼ö ÀÖ½À´Ï´Ù.
¶ÇÇÑ, Ư¼ö ÆéŸÀ̵å,
terminal modification, labeling, conjugation, ÆéŸÀ̵å
Ç×ü
Á¦ÀÛ µî ´Ù¾çÇÑ ºÎ°¡ ¼ºñ½ºµµ
Á¦°øÇÕ´Ï´Ù.
* ¿¬±¸¿ë
ÇÕ¼º ÆéŸÀ̵å
ÀÚµ¿ ÇÕ¼º±â¸¦ ÀÌ¿ëÇÏ¿© SPPS(Solid Phase Peptide
Synthesis) ±â¹ýÀ¸·Î
ÀÌ·ç¾îÁý´Ï´Ù.
´Ù¾çÇÑ ¿ë·®ÀÇ ÆéŸÀ̵å ÇÕ¼ºÀÌ ÃÖÀûȵǾî ÀÖÀ¸¸ç ¿¬±¸ÀÚ°¡ ¿øÇÏ´Â ¾Æ¹Ì³ë»ê
¼¿´ë·Î Á¤È®ÇÏ°Ô ÇÕ¼ºÇÒ ¼ö ÀÖ½À´Ï´Ù.
* Quality
peptides
ÇÕ¼º¿À·ù 0%¸¦ À§ÇØ °¢ ´Ü°è¸¦ 3¹ø Á¡°ËÇÏ´Â error-proof ¾Æ¹Ì³ë»ê loading
¹æ½ÄÀ»
»ç¿ë
ÇÕ´Ï´Ù.¶ÇÇÑ ¸ðµç ÆéŸÀ̵å´Â HPLC ºÐ¼® ¹× MASS µ¥ÀÌÅͰ¡ ÷ºÎµÇ¸ç ¾ö°ÝÇÑ
ǰÁú°ü¸®¸¦ ÅëÇØ °ø±ÞµÇ°í ÀÖ½À´Ï´Ù.
* Fast peptides
¸ðµç ÆéŸÀ̵å´Â ¾à 2ÁÖ ³»¿¡ ¿Ï¼ºÇÏ¿© µ¿°á °ÇÁ¶µÈ ºÐ¸» ÇüÅ·Π°ø±ÞÇØ µå¸³´Ï´Ù.
* Low cost
»ç¿ëÀÚÀÇ Á÷Á¢ ÁÖ¹®À» ÅëÇØ º¸´Ù Àú·ÅÇÑ ºñ¿ëÀÇ ¼ºñ½º¸¦ Á¦°øÇϰí ÀÖÀ¸¸ç, Áö¼ÓÀûÀÎ
񃬣
°³¹ß·Î °ø±Þ °¡°ÝÀÇ ÀÎÇϸ¦ À§ÇØ ²÷ÀÓ¾øÀÌ ³ë·ÂÇϰí ÀÖ½À´Ï´Ù.
ÇÕ¼º ºñ¿ëÀº ÆéŸÀ̵åÀÇ ¼øµµ, ¾ç,
modification Á¾·ù¿¡ µû¶ó °áÁ¤µÇ¸ç, º°µµÀÇ set-up
ºñ¿ëÀ̳ª ¹è¼Ûºñ´Â ¾ø½À´Ï´Ù.
¸ðµç ÆéŸÀ̵å
ÇÕ¼ºÀ» º¸ÀåÇÏ¸ç ºÒ¸¸Á·½Ã Ãß°¡ ºñ¿ë ¾øÀÌ ÀçÇÕ¼º ÇØµå¸³´Ï´Ù.
|
ÆäÀÌÁöÀ§·Î |
|
|

|
|
|
*
¼¼±ÕÀ» ÀÌ¿ëÇÑ ÀçÁ¶ÇÕ ´Ü¹éÁú ¹ßÇö
1)Ç×½ÃÀû °í¹ßÇö ½Ã½ºÅÛ(High Constitutive Expression system)
³ôÀº È¿À²ÀÇ ÀçÁ¶ÇÕ
´Ü¹éÁú »ý»ê À²°ú inductionÀÌ ÇÊ¿ä ¾ø½À´Ï´Ù.
2)Ç×»ý¹°Áú ºñÀÇÁ¸Çü °í¹ßÇö ½Ã½ºÅÛ(HCE- AMPFREEsytem) Inducer¿Í
Ç×»ý¹°ÁúÀÌ
ÇÊ¿äÄ¡ ¾Ê¾Æ »ê¾÷È¿¡ ÀûÇÕÇÕ´Ï´Ù.
3) ¾ÈÀü¼ºÀÌ ³ô°í ÀçÁ¶ÇÕ ´Ü¹éÁúÀÌ ¹è¾ç¾×À¸·Î ºÐºñµÇ¾î Á¤Á¦°¡ ¿ëÀÌÇÏ¿© ½Äǰ ¹×
ÀǾà
¿ë ´Ü¹éÁú ÀÇ »ê¾÷¿ë »ý»ê¿¡ À¯¿ëÇÕ´Ï´Ù.
*Baculovirus¿Í °ïÃæ¼¼Æ÷ÁÖ¸¦ ÀÌ¿ëÇÑ ÀçÁ¶ÇÕ
´Ü¹éÁú ¹ßÇö
1) °ïÃæ ¼¼Æ÷ÁÖ¸¦ ÀÌ¿ëÇϹǷΠÁøÇÙ ¼¼Æ÷ÀÇ post-translational modificationÀÌ
°¡´ÉÇÕ´Ï´Ù.
2) ¹ßÇöµÈ ÀçÁ¶ÇÕ ´Ü¹éÁúÀº Á¤È®ÇÏ°Ô foldingµÇ¸ç ±â´ÉÀ» °¡Áö´Â °æ¿ì Ȱ¼ºÀÌ
À¯ÁöµË´Ï´Ù.
3) ¼¼Æ÷ ³» ÃÑ ´Ü¹éÁú·®ÀÇ ÃÖ´ë 50% ¼öÁرîÁö ÀçÁ¶ÇÕ ´Ü¹éÁúÀÌ ÇÕ¼ºµÇ´Â ³ôÀº È¿À²ÀÇ
¹ßÇö ½Ã½ºÅÛ ÀÔ´Ï´Ù.
4) Suspension culture°¡ °¡´ÉÇÏ¿© ÀçÁ¶ÇÕ ´Ü¹éÁúÀÇ ´ë·® »ý»êÀÌ °¡´ÉÇÕ´Ï´Ù.
5) ¹ßÇöÀ» ¿øÇÏ´Â À¯ÀüÀÚÀÇ Å©±â¿¡´Â Á¦ÇÑÀÌ ¾øÀ¸¸ç, ¹Ì»ý¹°, ½Ä¹°, µ¿¹° ¹× Àΰ£ µî
´Ù¾çÇÑ »ý¹° À¯·¡ÀÇ À¯ÀüÀÚÀÇ ¹ßÇöÀÌ °¡´ÉÇÕ´Ï´Ù.
6) Baculovirus´Â °ïÃæ¿¡¸¸ °¨¿°µÇ¾î ¾ÈÀüÇÕ´Ï´Ù.
7) ºü¸£°í °æÁ¦ÀûÀÎ »ý»êÀÌ °¡´ÉÇÕ´Ï´Ù.
*¹ßÇö´Ü¹éÁú ½ºÅ©¸®´×
ÇüÁúÀüȯ ´ëÀå±Õ¶Ç´Â Baculovirus¸¦ ÀÌ¿ëÇÏ¿© ÃÖÀûÀÇ ¹ßÇöÁ¶°Ç°ú solubility¸¦
ºÐ¼®
ÇÏ¿©
µå¸³´Ï´Ù.
Solubility : ¼ö¿ë¾×¿¡ ÀÖ¾î¼ ´Ü¹éÁúµéÀÇ ¿ëÇØµµ´Â ±Ø¼ºÀÎ ¹° ºÐÀÚµé°ú ´Ü¹éÁú
ºÐÀÚµéÀÇ
ÀÌ¿ÂÈµÈ ¿øÀÚ´Üµé »çÀÌÀÇ Ä£¼ö¼º »óÈ£ÀÛ¿ë¿¡ µû¶ó¼ °áÁ¤µË´Ï´Ù.
±×·¯¹Ç·Î ¼ö¿ë¾×ÀÇ À¯Àü»ó¼ö ¶Ç´Â ÀÌ¿ÂÀÇ ¼¼±â¸¦ º¯È½Ãų ¼ö ÀÖ´Â ½Ã¾àµéÀº
´Ü¹éÁúÀÇ
¿ëÇØµµ¿¡ ¿µÇâÀ» ¹ÌÄ¥ °ÍÀÔ´Ï´Ù.
´Ü¹éÁúÀÇ º¯¼ºÀ» ÇÇÇÒ ¼ö ÀÖ´Â ³·Àº ¿Âµµ¿¡¼ ¿¡Åº¿Ã, ¾Æ¼¼Åæ, ¶Ç´Â Ȳ»ê¾Ï¸ð´½°ú
°°Àº
¿°µéÀ» ÷°¡ÇÏ¸é ´Ü ¹éÁúÀÌ Ä§ÀüµË´Ï´Ù.
ÀÌ·¯ÇÑ ±â¹ýµéÀ» ´Ü°èÀûÀ¸·Î »ç¿ëÇÔÀ¸·Î½á ´Ü¹éÁú È¥Çվ׿¡ ÀÖ´Â ´Ü¹éÁúµéÀ» ºÐº°
ħÀü
½Ãų ¼ö ÀÖ½À´Ï´Ù.
|
ÆäÀÌÁöÀ§·Î |

|
| |
´Ü¹éÁú Á¤Á¦¼ºñ½º ´Ü¹éÁúÀº ¾î¶² pH¿Í
ÀÌ¿ÂÀÇ ¼¼±âÀÇ Á¶°Ç¿¡¼ ¿©·¯ °¡Áö ¹°Áúµé¿¡
ÀÇ
ÇØ¼ ÈíÂø µË´Ï´Ù.
¿¹¸¦ µé¸é ÀλêÄ®½· °Ö°ú ¾Ë·ç¹Ì³ª °ÖÀÌ ¿©·¯ °¡Áö ´Ü¹éÁúµéÀÇ È¥ÇÕ¹°·ÎºÎÅÍ Æ¯Á¤ÇÑ
´Ü¹éÁúÀ» ÈíÂøÇÏ´Â µ¥ ÀÚÁÖ »ç¿ëµË´Ï´Ù.
°Ö¿¡ ÈíÂøµÈ ´Ü¹éÁúµéÀº pH¸¦ ¹Ù²Ù°Å³ª ÀÌ¿ÂÀÇ ¼¼±â¸¦ Áõ°¡½ÃÅ´À¸·Î½á À¯¸®½Ãų ¼ö
ÀÖÀ¸¹Ç·Î, °ÖÀ» °¡Áö°í ÇÊ¿ä ¾ø´Â ´Ü¹éÁúÀ» Á¦°ÅÇϰųª ¿øÇÏ´Â ´Ü¹éÁúÀ» ºÐ¸®ÇÔÀ¸·Î½á
Á¤Á¦ÇÒ ¼ö ÀÖ½À´Ï´Ù.
ÀúÈñ ÄÚ½º¸ðÁøÅآ߿¡¼´Â 6X his ¶Ç´Â GST ÈíÂøÄ÷³ µîÀ» ÀÌ¿ëÇÏ¿© ÀçÁ¶ÇÕ ´Ü¹éÁúÀ»
Á¤Á¦ÇÏ¿© µå¸³´Ï´Ù.
(1) ÈíÂø¼º ´Ü¹éÁúÀº pH¿Í ÀÌ¿ÂÀÇ
¼¼±â Á¶°Ç¿¡¼ ¿©·¯ °¡Áö ¹°Áúµé¿¡ ÀÇÇØ¼ ÈíÂø
µË´Ï´Ù.
¿¹¸¦ µé ¸é ÀλêÄ®½· °Ö°ú ¾Ë·ç¹Ì³ª °ÖÀÌ ¿©·¯ °¡Áö ´Ü¹éÁúµéÀÇ È¥ÇÕ¹°·ÎºÎÅÍ Æ¯Á¤ÇÑ
´Ü¹éÁúÀ» ÈíÂøÇÏ´Â µ¥ ÀÚÁÖ »ç¿ëµË´Ï´Ù.
°Ö¿¡ ÈíÂøµÈ ´Ü¹éÁúµéÀº pH¸¦ ¹Ù²Ù°Å³ª ÀÌ¿ÂÀÇ ¼¼±â¸¦ Áõ°¡½ÃÅ´À¸·Î½á À¯¸®½Ã ų ¼ö
ÀÖÀ¸¹Ç·Î, °ÖÀ» °¡Áö°í ÇÊ¿ä¾ø´Â ´Ü¹éÁúÀ» Á¦°ÅÇϰųª ¿øÇÏ´Â ´Ü¹éÁúÀ» ºÐ¸®ÇÔÀ¸·Î½á
Á¤Á¦ ÇÒ ¼ö ÀÖ½À´Ï´Ù.
(2) Å©·Î¸¶Åä±×·¡ÇǸ¦ ÀÌ¿ëÇÑ ºÐ¸®
¿©·¯ °¡Áö ÀüÇØÁúÀÎ ´Ü¹éÁúµéÀº À̿±³È¯
Å©·Î¸¶Åä±×·¡ÇÇ·Î ºÐ¸®ÇÒ ¼ö ÀÖ½À´Ï´Ù.
°¡Àå ÀϹÝÀûÀ¸·Î »ç¿ëµÇ´Â À̿±³È¯¼öÁö´Â ¼¿·ê·Î¿À½º, µ¦½ºÆ®¶õ, ¾Æ°¡·Î¿À½º ¹×
Æú¸®¾ÆÅ©¸±¾Æ¹ÌµåÀÇ À¯µµÃ¼µéÀÔ´Ï´Ù.
°¡Àå ÈçÈ÷ »ç¿ëµÇ°í ÀÖ´Â À½À̿ ±³È¯ ¼öÁöµéÀº µð¿¡Æ¿¾Æ¹Ì³ë ¿¡Æ¿(DEAE) ¶Ç´Â
Æ®¸®¿¡Æ¿¾Æ¹Ì³ë¿¡Æ¿(TEAE)±âµé·Î ġȯµÈ °ÍµéÀ̸ç, À¯¿ëÇÑ ¾çÀ̿±³È¯¼öÁöµéÀº
Ä«¸£º¹½Ã¸ÞÆ¿ Æ÷½ºÆ÷¸± ¶Ç´Â ¼úÆ÷¿¡Æ¿±âµé·Î ġȯµÈ À¯µµÃ¼µéÀÔ´Ï´Ù.
µ¦½ºÆ®¶õ ¾Æ°¡·Î¿À½º Æú¸®¾ÆÅ©¸±¾Æ¹Ìµå »ó¿¡¼ÀÇ °Ö ¹èÁ¦ Å©·Î¸¶Åä±×·¡Çǵµ
´Ü¹éÁúµéÀÇ ºÐ¸®¿¡ ¸¹ÀÌ »ç¿ëµÇ°í ÀÖ½À´Ï´Ù.
´Ü¹éÁú È¥ÇÕ¹°À» À̿±³È¯¼öÁö ´ë·Õ¿¡¼ ÈǸ¢ÇÏ°Ô ºÐ¸®Çϱâ À§Çؼ´Â ½Ã·á¸¦
´Ü°èÀûÀ¸·Î ¶Ç´Â ³óµµ±â¿ï±â¸¦ »ç¿ëÇÏ¿© ¿ë¸®ÇÏ´Â °ÍÀÌ º¸ÅëÀÔ´Ï´Ù.
±× ¹Û¿¡ °Ö °Å¸£±â Å©·Î¸¶Åä±×·¡ÇǸ¦ ÀÌ¿ëÇÏ¿© ºÐÀÚÀÇ Å©±â¿¡ µû¶ó¼ ºÐ¸®ÇÏ´Â
¹æ¹ýµµ ÈçÈ÷ »ç¿ëµÇ¸ç, ±âÁú ¶Ç´Â ¹æÇع°Áú°ú °°Àº ƯÀÌÇÑ ºÐÀڵ鿡 ´ëÇÑ È¿¼Ò
(¶Ç´Â ´Ü¹éÁú)ÀÇ ÀÚ¿¬ÀûÀΠģȼºÀ» ÀÌ¿ëÇÏ´Â Ä£È Å©·Î¸¶Åä±×·¡Çǰ¡ ¸Å¿ì À¯¿ëÇϰÔ
»ç¿ëµË´Ï´Ù.
´Ü¹éÁú°ú °áÇÕÇÏ´Â ºÐÀÚ¸¦ ¾Æ°¡·Î¿À½º¿Í °°Àº ºñºÒ¿ë¼ºÀÎ ÁöÁöü¿¡ °øÀ¯°áÇÕÀ¸·Î
°áÇÕ ½ÃŲÈÄ, À̰ÍÀ» Àû´çÇÑ ´Ü¹éÁúÀ» ¼±ÅÃÀûÀ¸·Î ÈíÂøÇÏ´Â ÁöÁöü·Î »ç¿ëÇÕ´Ï´Ù.
|
ÆäÀÌÁöÀ§·Î |
|

|
|

|
Rabbit, mouse, rat¸¦ ÀÌ¿ëÇÑ Polyclonal
¹× Monoclonal antibodyµµ Á¦ÀÛÇÏ¿©
µå¸³´Ï´Ù. ÀϹÝÀû
À¸·Î Ç×ü Á¦ÀÛ ¼ºñ½º¿¡¼´Â Ç׿ø Áغñ¸¸À¸·Î °¡´ÉÇϸç, ¿°±â¼¿
Á¤º¸¸¦ Åä´ë·Î Ç׿øÀÇ
epitope
°Ë»öµµ °¡´ÉÇÕ´Ï´Ù.
À¯ÀüÀÚÀÇ ¸ñÀû ¿µ¿ª¸¸ ÇÕ¼ºÇÏ°í ±×°ÍÀ» ¹ßÇö½ÃÄÑ Ç׿øÀ¸·Î ÀÌ¿ëÇÔÀ¸·Î½á,
±× ¿µ¿ª¿¡
¹ÝÀÀÇϴ ƯÀÌÇ×ü¸¦ È¿À²ÀûÀ¸·Î ¾òÀ» ¼ö ÀÖ½À´Ï´Ù.
1) ´ÙŬ·ÐÇ×ü(polyclonal antibody
production)
Ç׿øÀÇ ¿©·¯ »çÀÌÆ®¿¡ °áÇÕÇÏ´Â ´ÙŬ·Ð Ç×ü(polyclonal antibody)Á¦ÀÛÇÏ¿©
µå¸³´Ï´Ù.
´Ù¾çÇÑ
¸é¿ªµ¿¹°À» ÀÌ¿ëÇÏ¿© Á¦ÀÛÇÒ ¼ö ÀÖ½À´Ï´Ù.
Á¦À۱ⰣÀº 12-15ÁÖÁ¤µµ ¼Ò¿äµÇ¸ç, Â÷º°ÈµÈ
¼ºñ½º·Î
1,2Â÷ boosting ¸é¿ª ÈÄ
test serum À» äÃëÇÏ¿© ELISA test
°á°ú¸¦ º¸³»µå¸³´Ï´Ù.
À̸¦ ÅëÇÏ¿©
¿øÇÏ´Â ½ÇÇè¿¡¼ÀÇ Ç×ü»ý¼º ¿©ºÎ ÆÇ´Ü °¡´ÉÇÏ°Ô ÇØµå¸³´Ï´Ù.
´ëÁ¶±ºÀ¸·Î ÀÌ¿ëÇÒ ¼ö ÀÖµµ·Ï
¸é¿ª
Àü Ç÷û°ú ¸é¿ª ÈÄ¿¡ ÀüäÇ÷À» °°ÀÌ Á¦°øÇÏ¿©
µå¸³´Ï´Ù.
2) ´ÜŬ·ÐÇ×ü(monoclonal antibody
production)
Ç׿ø¿¡ ¼±ÅÃÀû ¹ÝÀÀÀ» º¸ÀÌ´Â ´ÜÀÏŬ·ÐÇ×ü (monoclonal antibody)¸¦ Á¦ÀÛÇÏ¿©
µå¸³´Ï´Ù.
´ÙŬ·ÐÇ×ü¿Í µ¿ÀÏÇÏ°Ô ´Ù¾çÇÑ ¸é¿ªµ¿¹°·Î¼ Á¦ÀÛÀÌ °¡´ÉÇÕ´Ï´Ù.
Á¦À۱ⰣÀº 18ÁÖ Á¤µµ ¼Ò¿äµÇ¸ç, ÃÖ¼Ò 3°³ÀÇ hybridoma clone°ú 1mlÀÇ
Ç×Ç÷ûÀ»
Á¦°øÇÏ¿© µå¸³´Ï´Ù.
|
ÆäÀÌÁöÀ§·Î |
|
°¡°ÝÇ¥°ü·Ã ´Ù¿î·Îµå |
|
|